扩增子测序基于二代高通量测序技术,对原核生物16S rDNA高变区、真核生物18S rDNA可变区或真菌ITS区域进行靶向检测,研究环境样品中微生物群落组成、分布特征、进化关系和微生物与环境之间的相互关系。
16S rDNA / 18S rDNA / ITS 多种扩增子选择,精准解析不同类群微生物多样性
靶向原核生物16S核糖体RNA基因高变区,解析细菌和古菌群落组成与多样性。
靶向真核生物18S核糖体RNA基因可变区,研究原生生物、藻类等低等真核微生物多样性。
靶向真菌内转录间隔区(ITS1/ITS2),高分辨率解析真菌群落组成与物种多样性。
| 对比维度 | 16S rDNA | 18S rDNA | ITS |
|---|---|---|---|
| 研究对象 | 细菌、古菌(原核生物) | 原生生物、藻类(真核微生物) | 真菌(酵母菌、霉菌等) |
| 基因区域 | 16S rRNA 基因高变区(V1-V9) | 18S rRNA 基因可变区 | 内转录间隔区 ITS1 / ITS2 |
| 分辨率 | 属水平为主,部分可达种 | 属水平为主 | 种水平分辨率高 |
| 参考数据库 | Silva / Greengenes / RDP | Silva / PR2 / Protist Ribosomal | UNITE / RDP / ITSoneDB |
| 典型样本 | 粪便、土壤、水体、肠道内容物 | 水体、土壤、海洋沉积物 | 土壤、植物、食品、临床样本 |
| 分析内容 | 物种组成、多样性、功能预测、进化分析 | 物种组成、多样性、群落结构 | 物种组成、多样性、功能注释、生态位分析 |
从DNA抽提到生物信息分析,全流程标准化管控
样本前处理
核酸提取纯化
特异性引物
靶向区域扩增
接头连接
文库质检定量
PE300长读长
高质量数据产出
物种注释
多样性与功能分析
物种组成 + 多样性 + 差异分析 + 功能预测,全方位挖掘微生物组数据价值
基于序列相似度进行OTU聚类或精确扩增子序列变异(ASV)分析,构建特征表。
Shannon、Simpson、Chao1、ACE、Coverage等指数,评估样本内物种丰富度与均匀度。
PCoA、NMDS、PCA等多维尺度分析,结合统计检验评估组间群落结构差异。
门纲目科属种各分类水平的群落组成可视化,堆叠柱状图、环形图、桑基图等。
LEfSe、Metastats、Wilcoxon等多种统计方法筛选组间差异物种,Biomarker鉴定。
基于代表性序列构建系统发育树,结合物种丰度进化树,分析物种亲缘关系与进化特征。
PICRUSt2、Tax4Fun等工具预测菌群功能基因组成,KEGG/COG功能通路注释与富集分析。
物种共现网络分析,挖掘核心物种(keystone species),解析菌群间相互作用关系。
* 具体分析内容可根据研究需求灵活调整,详询技术顾问
平台 + 技术 + 团队 + 质控,全方位保障服务质量
支持16S rDNA、18S rDNA、ITS三大类扩增子,覆盖细菌、古菌、真菌、原生生物等主要微生物类群。
高通量PE300测序平台,双端长读长拼接获得更长扩增子序列,物种分类分辨率更高。
标准化分析流程覆盖物种组成、多样性、差异物种、功能预测等20+分析方法,30+专业图表输出。
已完成上万例样本的微生物多样性测序分析项目,涵盖临床、环境、农业等多领域,大样本量项目经验丰富。
可与代谢组、转录组、蛋白组等多组学数据联合分析,深度挖掘微生物-宿主互作机制,提升研究价值。
提供30+种专业分析图表,包括堆叠图、热图、进化树、网络图、LEfSe进化分支图等,可直接用于论文发表。
多种样本类型兼容,专业技术人员全程指导样本准备
| 样本类型 | 推荐起始量 | 保存条件 | 注意事项 |
|---|---|---|---|
| 粪便 | ≥ 200 mg | -80℃ 保存,干冰运输 | 新鲜粪便样本分装后立即冻存,避免反复冻融;注意避免尿液和血液污染 |
| 肠道内容物 | ≥ 200 mg | -80℃ 保存,干冰运输 | 动物处死后尽快取肠道内容物,分装冻存;不同肠段需分别采集并标记 |
| 唾液 | ≥ 1 mL | -80℃ 保存,干冰运输 | 收集前30分钟禁食禁水,使用无菌唾液收集管;避免食物残渣污染 |
| 皮肤拭子 | 拭子 2-3 根/部位 | -20℃ 或 -80℃ 保存 | 采样前24小时避免洗澡和使用护肤品;同一部位反复擦拭10-20次;无菌操作 |
| 土壤 | ≥ 2 g | -80℃ 保存,干冰运输 | 去除表层土壤,采集5-20cm深度样本;多点混合采样后立即冻存,注意去杂质 |
| 水体 | 滤膜 / 1-5L水 | 滤膜-20℃ 或 -80℃ 保存 | 采集后尽快用0.22μm滤膜过滤富集微生物;根据水体浊度调整过滤体积 |
| 空气滤膜 | 滤膜 1-2 张 | -20℃ 保存,常温运输 | 记录采样时间、地点、流量和总体积;滤膜对折后装入无菌离心管,避免污染 |
| 植物根际 | ≥ 2 g | -80℃ 保存,干冰运输 | 收集根系表面紧密附着的土壤作为根际样本;根系用PBS缓冲液洗涤收集菌液 |
| 食品 | ≥ 2 g / 2 mL | -80℃ 保存,干冰运输 | 固态样品需无菌均质化处理;液态样品可直接或离心富集后送样;注意无菌操作 |
* 其他类型样本请咨询技术顾问,送样前建议先进行样本质量评估
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