表观组研究 位点验证

焦磷酸测序服务
特定位点甲基化精准检测

单碱基分辨率精准检测特定位点甲基化水平,适用于少量位点、多样本的快速验证与临床转化研究。

Pyrosequencing Principle Single-Base Resolution
C G C mC C T G A Template DNA (Bisulfite Converted) Sequencing Primer G dNTP added PPi ATP Sulfurylase APS + PPi → ATP Luciferase Luciferin → Light Signal Output G A T C mC 75% Primer Annealing Extension & PPi Release Light Detection
单碱基分辨率
PyroMark
技术说明

焦磷酸测序技术特点

基于焦磷酸测序原理的甲基化检测技术,适用于特定位点验证、临床样本检测、大样本量队列研究等场景。可提供引物设计、实验检测到数据分析的完整服务。

服务流程

四步标准化服务流程

从样本接收到结果交付,全流程高效可控

1

样本接收

样本信息核对与质量初检

2

实验检测

亚硫酸氢盐转化 + 焦磷酸测序

3

数据分析

甲基化定量 + 统计分析

4

结果交付

位点报告 + 原始数据交付

服务方案

灵活的服务方案选择

标准方案满足常规需求,定制方案支持位点灵活设计

方案名称 检测内容 适用场景 周期 价格
标准检测
最常用
1-5 个 CpG 位点 / 每样本 少量位点验证、临床样本检测 视项目而定 咨询获取
定制位点
灵活定制
6-20 个 CpG 位点 / 每样本 靶标区域深度验证、多位点联合分析 视项目而定 咨询获取
大样本量
批量优惠
特定位点 / 50 例以上样本 大队列验证、临床标志物验证 视项目而定 咨询获取

样本要求

样本类型 推荐起始量 最低起始量 运输条件
组织样本 ≥ 10 mg / ≥ 500 ng DNA ≥ 200 ng DNA -80℃ 冻存,干冰运输
全血样本 ≥ 200 μL / ≥ 500 ng DNA ≥ 200 ng DNA EDTA 抗凝,冰袋运输
FFPE 样本 ≥ 3 片 / ≥ 500 ng DNA ≥ 200 ng DNA 常温运输
细胞样本 ≥ 5×10⁵ / ≥ 500 ng DNA ≥ 200 ng DNA -80℃ 冻存,干冰运输
生信分析

三级生信分析方案

标准分析+高级分析+定制分析,灵活匹配不同研究深度需求

标准分析

基础研究必备,覆盖全流程标准分析项

分析内容 解决问题
样本质控评估 核酸浓度与纯度检测,确保样本质量达标
PCR扩增与测序反应 目标区域特异性扩增与焦磷酸测序反应
甲基化精确定量 每个CpG位点的精确甲基化百分比定量
测序峰图文件 提供原始测序峰图文件,结果可追溯
样本间结果对比 不同样本间特定位点甲基化水平对比
数据汇总报告 标准化Excel报告,含所有位点定量结果汇总

高级分析

深入挖掘数据价值,助力高水平论文发表

分析内容 解决问题
多样本统计分析 组间差异显著性检验与统计可视化
临床性状关联分析 甲基化水平与临床病理参数的相关性分析
诊断效能评估 ROC曲线分析、灵敏度与特异性评估
生存分析与预后价值 Kaplan-Meier生存分析与Cox回归模型构建
甲基化图谱绘制 多个位点的甲基化模式图谱可视化

定制分析

课题专属定制方案,满足个性化研究需求

分析内容 解决问题
特定位点引物设计 针对目标基因/位点一对一优化设计引物
大样本量验证方案 数百至数千样本的高通量验证服务方案
个性化图表定制 按期刊发表要求定制分析图表样式
多平台联合验证 焦磷酸测序与芯片/测序数据联合验证

* 具体分析内容可根据研究需求灵活调整,详询技术顾问

常见问题

FAQ

关于焦磷酸测序服务,您可能想了解的问题

1. 焦磷酸测序和甲基化芯片怎么选?
两者定位不同,取决于位点数和样本量:
焦磷酸测序适合 1-20 个特定位点、多样本(几十到上千例)的验证研究,单碱基分辨率精准定量,单位点成本低,周期短。
甲基化芯片适合全基因组范围(935K CpG)的高通量筛选,适合样本量中等、需要大规模位点发现的研究。
建议策略:先用芯片筛选候选位点,再用焦磷酸测序在大队列中验证。
2. 可以只测 1-2 个位点吗?
可以的。焦磷酸测序的核心优势就是灵活的位点定制,哪怕只测 1 个 CpG 位点也可以开展。特别适合:1)已有候选位点需要在大量临床样本中验证;2)临床检测中关注少数关键甲基化标志物。我们也可以根据您的研究目标协助设计合适的位点覆盖方案。
4. 最低需要多少 DNA?
推荐起始量为 500ng-1μg 高质量 DNA。最低支持 200ng DNA 起始(需预评估样本质量)。对于 FFPE 等降解样本,建议提供尽量多的起始材料,我们会在实验前进行质量评估,确保实验成功率。如果您的样本量特别稀少,请先联系技术顾问评估可行性。
5. 数据交付格式是什么?
交付内容包括:各 CpG 位点甲基化百分比定量表(Excel/CSV 格式)、统计分析结果表、可视化图表(PNG/PDF 格式)、原始测序峰图文件,以及完整的分析报告(PDF 格式)。数据通过云盘链接交付,支持长期存储与下载。
6. FFPE 样本可以做吗?
可以。焦磷酸测序对 FFPE 样本有较好的兼容性,由于扩增片段通常较短(几十到一百多 bp),对部分降解的 DNA 样本仍可有效检测。建议使用 2 年以内的 FFPE 样本,肿瘤细胞含量 ≥ 20%。送样前我们会先进行样本质量与亚硫酸氢盐转化率评估。
7. 焦磷酸测序可以检测哪些类型的甲基化?
焦磷酸测序主要检测CpG位点的DNA甲基化(5mC),也可通过不同的化学处理检测羟甲基化(5hmC)。除甲基化检测外,焦磷酸测序还可用于SNP基因分型、微生物鉴定、突变检测等多种应用。中科普瑞可根据您的研究需求定制检测方案。
8. 焦磷酸测序和Sanger测序有什么区别?
焦磷酸测序基于合成测序原理,可对目标区域进行定量检测(如精确到百分比的甲基化水平),特别适合混合样本的定量分析;Sanger测序基于双脱氧终止法,主要用于定性测序,读长更长但定量能力有限。在甲基化检测领域,焦磷酸测序是特定位点验证的金标准方法。
10. 焦磷酸测序可以替代甲基化芯片吗?
两者是互补关系而非替代关系:甲基化芯片(如EPIC 935K)适合全基因组规模的差异位点筛选(93.5万位点全景扫描),适合发现阶段;焦磷酸测序适合对芯片或测序筛选出的候选位点进行大样本量验证,是标志物验证的金标准。通常研究路线是"芯片/测序筛选 → 焦磷酸测序验证"的两阶段策略。

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021-58086128
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